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FITOQUÍMICA
“ TÉCNICAS DE EXTRACCIÓN E
     IDENTIFICACIÓN DE
   PRINCIPIOS ACTIVOS DE
   PLANTAS MEDICINALES”
LA EXTRACCIÓN DEL MATERIAL
                         VEGETAL
 Se puede dividir en:
 Parte aérea
    – (flores, fruto, semillas, hojas y tallo)
   Raíz
       El estudio fitoquímico, puede ser de la
    planta en general ó en sus respectivas partes
    que la constituyen, para un mejor análisis.
EXTRACTO ETÉREO

   La planta seca y molida se extrae en un
    Soxhlet, con éter de petróleo o hexano
    durante 7 días a una temperatura de 20º-
    30ºC.


        Al término de éste tiempo observar
    si hay un precipitado, en caso de
    tenerlo, filtrar inmediatamente y
    evaporar el filtrado.
El filtrado etéreo ya
             evaporado:
1.   Se refluja con metanol una hora (15ml
     de metanol por cada gramo de extracto)
2.   Se deja enfriar
3.   Separar el insoluble
4.   Pesar lo insoluble y soluble
5.   Si es posible tomar el punto de fusión al
     insoluble y sacar cromatografía.
6.   Al soluble en metanol sacar
     cromatografìa y pesarlo.
De 3 a 4 gramos de extracto
soluble   en   metanol    (ya
evaporado) montarlo en una
columna empacada con sílica
gel (35-70 mesh Astm), se
requiere 20 gramos de sílica
por cada gramo de extracto.
Extracto etéreo o hexánico soluble en
metanol mezclado con sílica gel

Silica gel tipo 60 (35-70 mesh Astm)



            Algodón
Empezar a eluir la columna

        ELUENTE                     PROPORCIÓN
   HEXANO

   HEXANO-ACETONA                      9.5 / .5

   HEXANO-ACETONA                      9.0 / 1.0

   ACETONA

   ACETONA-METANOL                     9.5 / .5

   ACETONA METANOL                     9.0 / 1.0

   METANOL



Recolectando fracciones de 125 ml
PRUEBAS PARA DETECTAR
TIPOS DE COMPUESTOS EN LOS
         EXTRACTOS
  Punto de fusión del precipitado.
  Observar las cromatografìas al UV marcando
   las manchas fluorescentes con un capilar.
  Revelar con      Yodo     (revelador   general)
   Observar.
  Revelar con cloruro de cobalto.
  Revelar con: Dragendorff modificado (si la
   mancha persiste más de 24 horas, es positiva
   para alcaloides).
  Erlich (revelador, para compuestos con anillo
   furánico)
PRUEBAS QUÍMICAS
PRELIMINARES PARA TODO TIPO
        DE EXTRACTO
    Saponinas
    Shinoda
    Taninos
    Antrona
    Nitrato de plata
    Liebermann-Burchard
EXTRACTO METANÓLICO

   Después de haber extraído la planta con
éter o hexano se extrae ahora con metanol
durante 7 dìas, al término de este tiempo
observar si hay precipitado, en caso de
haberlo filtrar, pesar y al filtrado
evaporarlo y pesarlo.
Al filtrado metanólico (ya
evaporado), se extrae con
cloroformo y agua en una
proporción 3 / 1 en un embudo
de separación, agitar y dejar
reposar 20 minutos

     En ocasiones se forman
tres capas, que son:
• Capa acuosa.-
    Liofilizar, para sus pruebas químicas
      preliminares.

• Capa intermedia.-
   Filtrar a sequedad para sus pruebas
    físicas y químicas

• Capa clorofórmica.-
   Evaporar, para montarlo en la columna y
   empezar a eluirla como lo descrito en el
   extracto etéreo.
EXTRACTO ACUOSO
   Después de haber extraído la planta en
Soxhlet con los solventes anteriores, toca el turno
ahora de hacer la extracción con agua (destilada),
durante 7 días.


   La solución acuosa se le hace la extracción
con acetato de etilo en un embudo de separación,
para separar lo soluble e insoluble
A lo soluble en acetato de etilo
evaporarlo y pesar para montar
columna, empezando a eluir con
cloroformo, cloroformo-metanol 9.5 /
1.5 , 9 / 1 ......... hasta llegar a metanol.
       Al insoluble (solución acuosa),
liofilizar
ARRASTRE POR VAPOR

Los aceites esenciales se obtienen por
  éste método con planta fresca y los
  componentes del aceite, se pueden
  separar por medio de la columna
  cromatográfica, eluyendo primero con:
     Éter de petróleo o hexano
y       después se va aumentando la
    polaridad.
El agua que quedó del arrastre por vapor se le hace la
extracción con cloroformo en un aparato líquido-líquido ,
     durante 5 días a una temperatura de 30°- 40° C


                                        El extracto clorofórmico se
                                      evapora y es lo que se montara
                                        en columna, eluyendo con
                                     solventes de polaridad creciente.




Fig. 32. Extractor líquido-líquido
EXTRACTO METANÓLICO DIRECTO
                                Material
                                Vegetal
                                         Metanol (Soxhlet)


             Sol Metanol                            Ins Metanol
                               REFLUJO 1 hr.


                Hexano

Sol Hexano                 Ins Hexano



                            Cloroformo

             Sol Cloroformo              Ins Cloroformo



                                         Acetato de Etilo
                           Sol Acetato de            Ins Acetato de
                                Etilo                     Etilo
LIXIVIACIÓN DE MATERIAL
          VEGETAL

    Es dejar el material vegetal fresco en un
recipiente (del tamaño que se requiera según la
cantidad de material vegetal) a temperatura
ambiente, durante tres dìas, con acetona, sín
ser necesario cortar en trozos dicho material.


   Después de este tiempo se decanta y se
evapora la acetona.
BIOENSAYOS Y PRUEBAS
       QUIMICAS
  PRELIMINARES PARA
       DETECTAR
ACTIVIDAD BIOLÓGICA EN
   VARIAS PLANTAS.
Utilizando pequeñas cantidades de material
vegetal se pueden hacer extracciones, para
determinar      mediante      pruebas     químicas
preliminares que tipos de compuestos puedan
contener, las diferentes plantas a examinar


      Así también se obtienen pequeñas
cantidades de extracto en forma más rápida, para
realizar los bioensayos y determinar la actividad
biológica de cada una de las plantas.
Los compuestos puros se
        someten
a diversos métodos para
 elucidar su estructura.
Métodos
Métodos Físicos         Espectroscópicos

 1.- Punto de fusión.   1.- Ultravioleta.
                        2.-Resonancia       Magnética
                           Nuclear.
                        3.-Infrarrojo.
                        4.- Rotación Óptica.
                        5.- Espectro de Masas
                        6.- Espectro de Difracción
                           de Rayos X
Métodos Químicos

1.- Ignición
2.- Instauraciones.- Prueba de tetranitrometano (TNM).
3.- Prueba de bromo en tetracloruro de carbono
4.- Prueba de permanganato de potasio
5.- Grupo carbonilo.- Prueba de la 2, 4-dinitrofenilhidrazina
6.- Grupo carboxilo.- Prueba de bicarbonato de sodio.
7.- Oxhidrilos fenólicos, (Taninos).-    Prueba de cloruro
   férrico
8.- Esteroides y triterpenos. Prueba de Liebermann-
   Burchard.
9.- Saponinas
10.- Flavonoides
11.- Carbohidratos.- Prueba de la Antrona
12.- Coumarinas.-
13.- Alcaloides.- Prueba de Dragendorff.
14.- Ehrlich.-
15.- Prueba de aromaticidad.-
16.- Prueba para identificar nitritos (NO2)
17.- Prueba para cloruros.-
18.- Prueba de Belstein.- (halógenos),
19.- Prueba para identificar Cianuros.-
20.- Para identificar una sal de cloruro de amonio (NH4Cl),
  agregar hidróxido de sodio y tapar con papel ph idriòn y
  ver los cambios;


           NH4Cl + NaOH          NaCl + NH4OH
PREPARACIÒN DE ALGUNOS
      REVELADORES PARA
   CROMATOGRAFÌA EN CAPA
          DELGADA
1. CLORURO     DE   COBALTO     (Revelador
   general)
2. DRAGENDROFF MODIFICADO
3. EHRLICH (Para compuestos con anillo
   furánico)
4. REVELADOR PARA POLIHOLES
5. MARQUIZ (Revelador de alcaloides)
6. REVELADOR PARA QUINONAS
7. REVELADOR PARA SESQUITERPENLACTONAS
8. REVELADOR PARA AZÚCARES.-
9. REVELADOR PARA ACEITES ESCENCIALES.-
10. REVELADOR PARA FLAVONOIDES (SALES DE
    DIAZONIO).-
11. REVELADOR PARA COMPUESTOS QUE LLEVE
    EL GRUPO CETONA.-
12. REACTIVO DE KELLER           –   KILLIANI   (Para
    glicósidos cardiotónicos),
La naturaleza nos ofrece una gama extensa
de compuestos con actividad biológica,
muchos de ellos aún a la espera de ser
descubiertos. El uso de las plantas
medicinales, no significa que se va a eliminar
la vegetación o ir en contra de la Ecología ya
que después de ser encontrado el
componente con actividad biológica, éste
puede ser posteriormente sintetizado en los
laboratorios.
En algunos casos, un compuesto vegetal se
   puede “copiar” en el laboratorio, es decir,
    sintetizarlo completamente en grandes
cantidades, como la L Efedrina, originalmente
aislado de Ephedra distachya, que se emplea
      contra el asma y la fiebre del heno.
Y saber que en México contamos con una
gran cantidad de especies vegetales y por
que no, también contamos con curanderos
indígenas, con grandes conocimientos que
heredaron de sus ancestros y así podríamos
aprender, a contribuir a un mejor desarrollo
social, económico y de salud para el país,
con beneficio general para la humanidad,
descubriendo y desentrañando los misterios
de las plantas medicinales.

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Algas
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Fitoquímica

  • 1.
  • 3. “ TÉCNICAS DE EXTRACCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE PRINCIPIOS ACTIVOS DE PLANTAS MEDICINALES”
  • 4. LA EXTRACCIÓN DEL MATERIAL VEGETAL  Se puede dividir en:  Parte aérea – (flores, fruto, semillas, hojas y tallo)  Raíz El estudio fitoquímico, puede ser de la planta en general ó en sus respectivas partes que la constituyen, para un mejor análisis.
  • 5. EXTRACTO ETÉREO  La planta seca y molida se extrae en un Soxhlet, con éter de petróleo o hexano durante 7 días a una temperatura de 20º- 30ºC. Al término de éste tiempo observar si hay un precipitado, en caso de tenerlo, filtrar inmediatamente y evaporar el filtrado.
  • 6. El filtrado etéreo ya evaporado: 1. Se refluja con metanol una hora (15ml de metanol por cada gramo de extracto) 2. Se deja enfriar 3. Separar el insoluble 4. Pesar lo insoluble y soluble 5. Si es posible tomar el punto de fusión al insoluble y sacar cromatografía. 6. Al soluble en metanol sacar cromatografìa y pesarlo.
  • 7. De 3 a 4 gramos de extracto soluble en metanol (ya evaporado) montarlo en una columna empacada con sílica gel (35-70 mesh Astm), se requiere 20 gramos de sílica por cada gramo de extracto.
  • 8. Extracto etéreo o hexánico soluble en metanol mezclado con sílica gel Silica gel tipo 60 (35-70 mesh Astm) Algodón
  • 9.
  • 10. Empezar a eluir la columna ELUENTE PROPORCIÓN HEXANO HEXANO-ACETONA 9.5 / .5 HEXANO-ACETONA 9.0 / 1.0 ACETONA ACETONA-METANOL 9.5 / .5 ACETONA METANOL 9.0 / 1.0 METANOL Recolectando fracciones de 125 ml
  • 11. PRUEBAS PARA DETECTAR TIPOS DE COMPUESTOS EN LOS EXTRACTOS Punto de fusión del precipitado. Observar las cromatografìas al UV marcando las manchas fluorescentes con un capilar. Revelar con Yodo (revelador general) Observar. Revelar con cloruro de cobalto. Revelar con: Dragendorff modificado (si la mancha persiste más de 24 horas, es positiva para alcaloides). Erlich (revelador, para compuestos con anillo furánico)
  • 12. PRUEBAS QUÍMICAS PRELIMINARES PARA TODO TIPO DE EXTRACTO  Saponinas  Shinoda  Taninos  Antrona  Nitrato de plata  Liebermann-Burchard
  • 13. EXTRACTO METANÓLICO Después de haber extraído la planta con éter o hexano se extrae ahora con metanol durante 7 dìas, al término de este tiempo observar si hay precipitado, en caso de haberlo filtrar, pesar y al filtrado evaporarlo y pesarlo.
  • 14. Al filtrado metanólico (ya evaporado), se extrae con cloroformo y agua en una proporción 3 / 1 en un embudo de separación, agitar y dejar reposar 20 minutos En ocasiones se forman tres capas, que son:
  • 15. • Capa acuosa.- Liofilizar, para sus pruebas químicas preliminares. • Capa intermedia.- Filtrar a sequedad para sus pruebas físicas y químicas • Capa clorofórmica.- Evaporar, para montarlo en la columna y empezar a eluirla como lo descrito en el extracto etéreo.
  • 16. EXTRACTO ACUOSO Después de haber extraído la planta en Soxhlet con los solventes anteriores, toca el turno ahora de hacer la extracción con agua (destilada), durante 7 días. La solución acuosa se le hace la extracción con acetato de etilo en un embudo de separación, para separar lo soluble e insoluble
  • 17. A lo soluble en acetato de etilo evaporarlo y pesar para montar columna, empezando a eluir con cloroformo, cloroformo-metanol 9.5 / 1.5 , 9 / 1 ......... hasta llegar a metanol. Al insoluble (solución acuosa), liofilizar
  • 18. ARRASTRE POR VAPOR Los aceites esenciales se obtienen por éste método con planta fresca y los componentes del aceite, se pueden separar por medio de la columna cromatográfica, eluyendo primero con:  Éter de petróleo o hexano y después se va aumentando la polaridad.
  • 19. El agua que quedó del arrastre por vapor se le hace la extracción con cloroformo en un aparato líquido-líquido , durante 5 días a una temperatura de 30°- 40° C El extracto clorofórmico se evapora y es lo que se montara en columna, eluyendo con solventes de polaridad creciente. Fig. 32. Extractor líquido-líquido
  • 20. EXTRACTO METANÓLICO DIRECTO Material Vegetal Metanol (Soxhlet) Sol Metanol Ins Metanol REFLUJO 1 hr. Hexano Sol Hexano Ins Hexano Cloroformo Sol Cloroformo Ins Cloroformo Acetato de Etilo Sol Acetato de Ins Acetato de Etilo Etilo
  • 21. LIXIVIACIÓN DE MATERIAL VEGETAL Es dejar el material vegetal fresco en un recipiente (del tamaño que se requiera según la cantidad de material vegetal) a temperatura ambiente, durante tres dìas, con acetona, sín ser necesario cortar en trozos dicho material. Después de este tiempo se decanta y se evapora la acetona.
  • 22. BIOENSAYOS Y PRUEBAS QUIMICAS PRELIMINARES PARA DETECTAR ACTIVIDAD BIOLÓGICA EN VARIAS PLANTAS.
  • 23. Utilizando pequeñas cantidades de material vegetal se pueden hacer extracciones, para determinar mediante pruebas químicas preliminares que tipos de compuestos puedan contener, las diferentes plantas a examinar Así también se obtienen pequeñas cantidades de extracto en forma más rápida, para realizar los bioensayos y determinar la actividad biológica de cada una de las plantas.
  • 24. Los compuestos puros se someten a diversos métodos para elucidar su estructura.
  • 25. Métodos Métodos Físicos Espectroscópicos 1.- Punto de fusión. 1.- Ultravioleta. 2.-Resonancia Magnética Nuclear. 3.-Infrarrojo. 4.- Rotación Óptica. 5.- Espectro de Masas 6.- Espectro de Difracción de Rayos X
  • 26. Métodos Químicos 1.- Ignición 2.- Instauraciones.- Prueba de tetranitrometano (TNM). 3.- Prueba de bromo en tetracloruro de carbono 4.- Prueba de permanganato de potasio 5.- Grupo carbonilo.- Prueba de la 2, 4-dinitrofenilhidrazina 6.- Grupo carboxilo.- Prueba de bicarbonato de sodio. 7.- Oxhidrilos fenólicos, (Taninos).- Prueba de cloruro férrico 8.- Esteroides y triterpenos. Prueba de Liebermann- Burchard. 9.- Saponinas 10.- Flavonoides
  • 27. 11.- Carbohidratos.- Prueba de la Antrona 12.- Coumarinas.- 13.- Alcaloides.- Prueba de Dragendorff. 14.- Ehrlich.- 15.- Prueba de aromaticidad.- 16.- Prueba para identificar nitritos (NO2) 17.- Prueba para cloruros.- 18.- Prueba de Belstein.- (halógenos), 19.- Prueba para identificar Cianuros.- 20.- Para identificar una sal de cloruro de amonio (NH4Cl), agregar hidróxido de sodio y tapar con papel ph idriòn y ver los cambios; NH4Cl + NaOH NaCl + NH4OH
  • 28. PREPARACIÒN DE ALGUNOS REVELADORES PARA CROMATOGRAFÌA EN CAPA DELGADA 1. CLORURO DE COBALTO (Revelador general) 2. DRAGENDROFF MODIFICADO 3. EHRLICH (Para compuestos con anillo furánico) 4. REVELADOR PARA POLIHOLES 5. MARQUIZ (Revelador de alcaloides)
  • 29. 6. REVELADOR PARA QUINONAS 7. REVELADOR PARA SESQUITERPENLACTONAS 8. REVELADOR PARA AZÚCARES.- 9. REVELADOR PARA ACEITES ESCENCIALES.- 10. REVELADOR PARA FLAVONOIDES (SALES DE DIAZONIO).- 11. REVELADOR PARA COMPUESTOS QUE LLEVE EL GRUPO CETONA.- 12. REACTIVO DE KELLER – KILLIANI (Para glicósidos cardiotónicos),
  • 30. La naturaleza nos ofrece una gama extensa de compuestos con actividad biológica, muchos de ellos aún a la espera de ser descubiertos. El uso de las plantas medicinales, no significa que se va a eliminar la vegetación o ir en contra de la Ecología ya que después de ser encontrado el componente con actividad biológica, éste puede ser posteriormente sintetizado en los laboratorios.
  • 31. En algunos casos, un compuesto vegetal se puede “copiar” en el laboratorio, es decir, sintetizarlo completamente en grandes cantidades, como la L Efedrina, originalmente aislado de Ephedra distachya, que se emplea contra el asma y la fiebre del heno.
  • 32. Y saber que en México contamos con una gran cantidad de especies vegetales y por que no, también contamos con curanderos indígenas, con grandes conocimientos que heredaron de sus ancestros y así podríamos aprender, a contribuir a un mejor desarrollo social, económico y de salud para el país, con beneficio general para la humanidad, descubriendo y desentrañando los misterios de las plantas medicinales.