SlideShare uma empresa Scribd logo
1 de 11
Інститут фізіології імені О. О. Богомольця
    Відділ загальної та молекулярної патофізіології




Вплив ω-3 поліненасичених жирних кислот
    на структурні зміни коннексину-43
    при стрептозотоцин-індукованому
            цукровому діабеті .

                 Науковий керівник –
   Академік НАН України Мойбенко Олексій Олексійович

                      Доповідач:
          аспірантка Жуковська Анна Сергіївна

                                               1
Конференція молодих вчених «Фізіологія: від молекул до організму», 20-21 жовтня 2011 року
                                                                          intracellular s.

                                                                         pl. membrane

                                                                          extrac. space

                                                                        pl. membrane

                                                                          intracellular s.
                                  connexon
                                 (hemichannel)     connexin pore

   Коннексини - це спеціалізовані мембранні білки, які, згруповуючись,
    утворюють канали між цитоплазмами двох суміжних клітин
    (коннексон).
   У щілинних контактах між кардіоміоцитами шлуночка серця
    експресується переважно коннексин-43 (Сх43), який забезпечує
    передачу електричного сигналу по серцю.
   При стрептозотоцин-індукованому діабеті спостерігається порушення
     розподілу і локалізації Сх43, що може корелювати з погіршенням
    серцевої провідності.
   Відомо, що ω-3 поліненасичені жирні кислоти (ПНЖК) покращують
    функціонування серця за умов різноманітної серцево-судинної
    патології.
   Грунтуючись на даних літератури припускаємо зміни розподілу і
    локалізації Сх43 в серці за умов експериментального діабету на фоні
    вживання ω-3 ПНЖК.
                      Жуковська А. С., відділ загальної та молекулярної патофізіології, 2011   2
Конференція молодих вчених «Фізіологія: від молекул до організму», 20-21 жовтня 2011 року

                             Мета, матеріали і методи



МЕТА: дослідити вплив ω-3 ПНЖК (препарат
  “Епадол”) на розподіл і локалізацію Сх43,
  виявленого в структурах серця і аорти при
  моделюванні експериментального
  цукрового діабету (ЦД).
МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ: Для досліду
  використано щурів самців, яких
  розподілено на 3 групи:1 – контрольну, n=7
  2 – щурів зі стрептозотоцин-індукованим
  (50 мг/кг) цукровим діабетом (ЦД), n=7,
  3 – щурів, які після підтвердження
  стрептозотоцин-індукованого ЦД протягом
  4 тиж отримували ω-3 ПНЖК, n=7
  (препарат «Епадол», 0,1 мл/100 г маси тіла
  щура) (містить 43% суми ДГК та ЕПК).



                         Жуковська А. С., відділ загальної та молекулярної патофізіології, 2011   3
Залежність показників маси тіла і рівню глюкози
      щурів при експериментальному ЦД і вживанні
                       ω-3 ПНЖК

                         232,85
                250                                                 219,7  **
                200                          177,5


                150
                                                                                              Масса тела крысы, г
                100                                                                           Глюкоза, мМ/л

                 50                                 33  *                 19,2  **
                                7,8

                  0
                        І группа           ІІ группа            ІІІ группа



Примітка: * - вірогідно у порівнянні з контролем, ** - вірогідно у порівнянні з цукровим діабетом; Р<0,05



                          Жуковська А. С., відділ загальної та молекулярної патофізіології, 2011   4
Діаграма 1. Вміст α-ліноленової та арахідонової
        кислот в гомогенаті тканини міокарда щурів
                  експериментальних груп


             α-ліноленова, ω-3 ПНЖК                                                 Арахідонова, ω-6 ПНЖК

       1,4                                                                45

       1,2
                                                                          40                       *
                                                                          35
        1
                                                                          30                           **
       0,8                                         І група                                                  І група
                                                                          25
                                                   ІІ група                                                 ІІ група
       0,6                                                                20
                                                   ІІІ група                                                ІІІ група
                                                                          15
       0,4
                                                                          10
       0,2
                                                                           5
        0                                                                  0



Примітка: * - вірогідно у порівнянні з контролем, ** - вірогідно у порівнянні з цукровим діабетом; Р<0,05


                          Жуковська А. С., відділ загальної та молекулярної патофізіології, 2011   5
Імуногістохімія
                         виявлення Сх43
                   в тканині лівого шлуночка
                      тварин дослідних груп
  
           КМЦ               5                           *
                                                                                          КМЦ
                             4



                             3



                             2
                                                                                                    Сх 43
Сх 43                        1



                             0
                                    І група           ІІ група         ІІІ група
             А                                                                            С
                                                                 Примітка:
                                                                 А - контроль, В – група ЦД, С – прийом ω-3 ПНЖК
                                                                 Сх 43 – коннексин 43, КМЦ – кардіоміоцит;
                                                                 збільшення Х40,
   Сх 43
                                                                 * - вірогідно у порівнянні з контролем,
                                                                 ** - вірогідно у порівнянні з цукровим діабетом;
             КМЦ                                          В
                                                                 Р<0,05                   6
                 Жуковська А. С., відділ загальної та молекулярної патофізіології, 2011
Діаграма 3. Зміни експресії Сх43 в тканині лівого
          шлуночка щурів експериментальних груп,
                   неопубліковані дані Шиш А. М.


 2,0                        *
 1,8
                                                **
 1,6

 1,4

 1,2

 1,0

 0,8

 0,6
                                                                                       І             ІІ       ІІІ
 0,4

 0,2

 0,0
          1             2                   3
        І група      ІІ група              ІІІ група

Примітка: * - вірогідно у порівнянні з контролем, ** - вірогідно у порівнянні з цукровим діабетом; Р<0,05



                            Жуковська А. С., відділ загальної та молекулярної патофізіології, 2011        7
Імуногістохімія
                                                                     виявлення Сх43
                                                                     в тканині аорти
                                                                         тварин
                         Сх 43
                                                                      дослідних груп

                                                               А
                                                                                                                                   Сх 43
              Число імунорективних частинок / 1 мм2
                           ендотелію

80000                                                                                                  С
70000                                                          Примітка:
60000

50000
                                                               А - контроль, В – група ЦД, С – прийом ω-3 ПНЖК
40000                                                          Сх 43 – коннексин 43
30000

20000

10000

     0


                                                                                                                Число імунорективних частинок / 1мм2
                                                                                                                         середньої оболонки
         Площа ІФ реакції / Площа виміряної тканини
                      в аорті (E+СО)                                                                   90 000


                                                                                                       80 000



                                                                             Сх 43
    5,00000
                                                                                                       70 000
    4,50000
    4,00000                                                                                            60 000
                                                                                                                                              #
    3,50000                                                                                            50 000
    3,00000                                           K
                                                                                                       40 000
    2,50000                                           STZ
%




                                           #
                                                      STZ+FO
    2,00000
                                *                                                                      30 000
                                                                                                                                   ##
    1,50000                                                                                            20 000
    1,00000

                                                                                                        8
                                                                                                       10 000



                                                               B
    0,50000
    0,00000                                                                                                0
Конференція молодих вчених «Фізіологія: від молекул до організму», 20-21 жовтня 2011 року

                                              Висновки

   Додавання ω-3 ПНЖК до раціону щурів статистично значимо
    попереджувало зниження маси тіла і призвело до зниження рівня
    глюкози крові у тварин з експериментальним ЦД .
   Виявлено, що за допомогою ω-3 ПНЖК відбувається модифікація
    жирнокислотного складу гомогенату тканини міокарда.
   За результатами імунофлуоресцентного аналізу при ЦД
    спостерігається порушення розподілу, дезорганізація і латералізація
    коннексину-43, зміна числа імунореактивних частинок коннексину-43
    у вставних дисках, порівняно з контролем.
   Отримання щурами ω-3 ПНЖК сприяло нормалізації розподілу
    коннексину-43 при експериментальному ЦД, а число
    імунореактивних частинок коннексину-43 наблизилось до
    контрольних значень.
   Отже, застосування ω-3 ПНЖК покращує структурні зміни
    коннексину-43 в серці та аорті, викликані ЦД і можуть бути
    корисними у зниженні ризику серцево-судинних ускладнень за цієї
    патології.

                       Жуковська А. С., відділ загальної та молекулярної патофізіології, 2011   9
Конференція молодих вчених «Фізіологія: від молекул до організму», 20-21 жовтня 2011 року

                                                   Виражаємо глибоку подяку співробітникам
                                                   Інституту серця САН, де частково
                                                   виконувалась робота:
                                                   •Трібуловій Нарціс
                                                   •Округліцовій Людмилі
                                                   •Беновій Тамарі

Щиро дякую за допомогу в роботі
співробітникам
Інституту фізіології НАНУ:
 Мойбенко Олексію Олексійовичу

 Скібо Галині Григорівні

 Шиш Анжелі Михайлівні

 Брюзгіній Тетяні Семенівні




                         Жуковська А. С., відділ загальної та молекулярної патофізіології, 2011   10
11

Mais conteúdo relacionado

Destaque

Everything You Need To Know About ChatGPT
Everything You Need To Know About ChatGPTEverything You Need To Know About ChatGPT
Everything You Need To Know About ChatGPTExpeed Software
 
Product Design Trends in 2024 | Teenage Engineerings
Product Design Trends in 2024 | Teenage EngineeringsProduct Design Trends in 2024 | Teenage Engineerings
Product Design Trends in 2024 | Teenage EngineeringsPixeldarts
 
How Race, Age and Gender Shape Attitudes Towards Mental Health
How Race, Age and Gender Shape Attitudes Towards Mental HealthHow Race, Age and Gender Shape Attitudes Towards Mental Health
How Race, Age and Gender Shape Attitudes Towards Mental HealthThinkNow
 
AI Trends in Creative Operations 2024 by Artwork Flow.pdf
AI Trends in Creative Operations 2024 by Artwork Flow.pdfAI Trends in Creative Operations 2024 by Artwork Flow.pdf
AI Trends in Creative Operations 2024 by Artwork Flow.pdfmarketingartwork
 
PEPSICO Presentation to CAGNY Conference Feb 2024
PEPSICO Presentation to CAGNY Conference Feb 2024PEPSICO Presentation to CAGNY Conference Feb 2024
PEPSICO Presentation to CAGNY Conference Feb 2024Neil Kimberley
 
Content Methodology: A Best Practices Report (Webinar)
Content Methodology: A Best Practices Report (Webinar)Content Methodology: A Best Practices Report (Webinar)
Content Methodology: A Best Practices Report (Webinar)contently
 
How to Prepare For a Successful Job Search for 2024
How to Prepare For a Successful Job Search for 2024How to Prepare For a Successful Job Search for 2024
How to Prepare For a Successful Job Search for 2024Albert Qian
 
Social Media Marketing Trends 2024 // The Global Indie Insights
Social Media Marketing Trends 2024 // The Global Indie InsightsSocial Media Marketing Trends 2024 // The Global Indie Insights
Social Media Marketing Trends 2024 // The Global Indie InsightsKurio // The Social Media Age(ncy)
 
Trends In Paid Search: Navigating The Digital Landscape In 2024
Trends In Paid Search: Navigating The Digital Landscape In 2024Trends In Paid Search: Navigating The Digital Landscape In 2024
Trends In Paid Search: Navigating The Digital Landscape In 2024Search Engine Journal
 
5 Public speaking tips from TED - Visualized summary
5 Public speaking tips from TED - Visualized summary5 Public speaking tips from TED - Visualized summary
5 Public speaking tips from TED - Visualized summarySpeakerHub
 
ChatGPT and the Future of Work - Clark Boyd
ChatGPT and the Future of Work - Clark Boyd ChatGPT and the Future of Work - Clark Boyd
ChatGPT and the Future of Work - Clark Boyd Clark Boyd
 
Getting into the tech field. what next
Getting into the tech field. what next Getting into the tech field. what next
Getting into the tech field. what next Tessa Mero
 
Google's Just Not That Into You: Understanding Core Updates & Search Intent
Google's Just Not That Into You: Understanding Core Updates & Search IntentGoogle's Just Not That Into You: Understanding Core Updates & Search Intent
Google's Just Not That Into You: Understanding Core Updates & Search IntentLily Ray
 
Time Management & Productivity - Best Practices
Time Management & Productivity -  Best PracticesTime Management & Productivity -  Best Practices
Time Management & Productivity - Best PracticesVit Horky
 
The six step guide to practical project management
The six step guide to practical project managementThe six step guide to practical project management
The six step guide to practical project managementMindGenius
 
Beginners Guide to TikTok for Search - Rachel Pearson - We are Tilt __ Bright...
Beginners Guide to TikTok for Search - Rachel Pearson - We are Tilt __ Bright...Beginners Guide to TikTok for Search - Rachel Pearson - We are Tilt __ Bright...
Beginners Guide to TikTok for Search - Rachel Pearson - We are Tilt __ Bright...RachelPearson36
 
Unlocking the Power of ChatGPT and AI in Testing - A Real-World Look, present...
Unlocking the Power of ChatGPT and AI in Testing - A Real-World Look, present...Unlocking the Power of ChatGPT and AI in Testing - A Real-World Look, present...
Unlocking the Power of ChatGPT and AI in Testing - A Real-World Look, present...Applitools
 

Destaque (20)

Everything You Need To Know About ChatGPT
Everything You Need To Know About ChatGPTEverything You Need To Know About ChatGPT
Everything You Need To Know About ChatGPT
 
Product Design Trends in 2024 | Teenage Engineerings
Product Design Trends in 2024 | Teenage EngineeringsProduct Design Trends in 2024 | Teenage Engineerings
Product Design Trends in 2024 | Teenage Engineerings
 
How Race, Age and Gender Shape Attitudes Towards Mental Health
How Race, Age and Gender Shape Attitudes Towards Mental HealthHow Race, Age and Gender Shape Attitudes Towards Mental Health
How Race, Age and Gender Shape Attitudes Towards Mental Health
 
AI Trends in Creative Operations 2024 by Artwork Flow.pdf
AI Trends in Creative Operations 2024 by Artwork Flow.pdfAI Trends in Creative Operations 2024 by Artwork Flow.pdf
AI Trends in Creative Operations 2024 by Artwork Flow.pdf
 
Skeleton Culture Code
Skeleton Culture CodeSkeleton Culture Code
Skeleton Culture Code
 
PEPSICO Presentation to CAGNY Conference Feb 2024
PEPSICO Presentation to CAGNY Conference Feb 2024PEPSICO Presentation to CAGNY Conference Feb 2024
PEPSICO Presentation to CAGNY Conference Feb 2024
 
Content Methodology: A Best Practices Report (Webinar)
Content Methodology: A Best Practices Report (Webinar)Content Methodology: A Best Practices Report (Webinar)
Content Methodology: A Best Practices Report (Webinar)
 
How to Prepare For a Successful Job Search for 2024
How to Prepare For a Successful Job Search for 2024How to Prepare For a Successful Job Search for 2024
How to Prepare For a Successful Job Search for 2024
 
Social Media Marketing Trends 2024 // The Global Indie Insights
Social Media Marketing Trends 2024 // The Global Indie InsightsSocial Media Marketing Trends 2024 // The Global Indie Insights
Social Media Marketing Trends 2024 // The Global Indie Insights
 
Trends In Paid Search: Navigating The Digital Landscape In 2024
Trends In Paid Search: Navigating The Digital Landscape In 2024Trends In Paid Search: Navigating The Digital Landscape In 2024
Trends In Paid Search: Navigating The Digital Landscape In 2024
 
5 Public speaking tips from TED - Visualized summary
5 Public speaking tips from TED - Visualized summary5 Public speaking tips from TED - Visualized summary
5 Public speaking tips from TED - Visualized summary
 
ChatGPT and the Future of Work - Clark Boyd
ChatGPT and the Future of Work - Clark Boyd ChatGPT and the Future of Work - Clark Boyd
ChatGPT and the Future of Work - Clark Boyd
 
Getting into the tech field. what next
Getting into the tech field. what next Getting into the tech field. what next
Getting into the tech field. what next
 
Google's Just Not That Into You: Understanding Core Updates & Search Intent
Google's Just Not That Into You: Understanding Core Updates & Search IntentGoogle's Just Not That Into You: Understanding Core Updates & Search Intent
Google's Just Not That Into You: Understanding Core Updates & Search Intent
 
How to have difficult conversations
How to have difficult conversations How to have difficult conversations
How to have difficult conversations
 
Introduction to Data Science
Introduction to Data ScienceIntroduction to Data Science
Introduction to Data Science
 
Time Management & Productivity - Best Practices
Time Management & Productivity -  Best PracticesTime Management & Productivity -  Best Practices
Time Management & Productivity - Best Practices
 
The six step guide to practical project management
The six step guide to practical project managementThe six step guide to practical project management
The six step guide to practical project management
 
Beginners Guide to TikTok for Search - Rachel Pearson - We are Tilt __ Bright...
Beginners Guide to TikTok for Search - Rachel Pearson - We are Tilt __ Bright...Beginners Guide to TikTok for Search - Rachel Pearson - We are Tilt __ Bright...
Beginners Guide to TikTok for Search - Rachel Pearson - We are Tilt __ Bright...
 
Unlocking the Power of ChatGPT and AI in Testing - A Real-World Look, present...
Unlocking the Power of ChatGPT and AI in Testing - A Real-World Look, present...Unlocking the Power of ChatGPT and AI in Testing - A Real-World Look, present...
Unlocking the Power of ChatGPT and AI in Testing - A Real-World Look, present...
 

Вплив ω-3 поліненасичених жирних кислот на структурні зміни коннексину-43 при стрептозотоцин-індукованому цукровому діабеті.

  • 1. Інститут фізіології імені О. О. Богомольця Відділ загальної та молекулярної патофізіології Вплив ω-3 поліненасичених жирних кислот на структурні зміни коннексину-43 при стрептозотоцин-індукованому цукровому діабеті . Науковий керівник – Академік НАН України Мойбенко Олексій Олексійович Доповідач: аспірантка Жуковська Анна Сергіївна 1
  • 2. Конференція молодих вчених «Фізіологія: від молекул до організму», 20-21 жовтня 2011 року intracellular s. pl. membrane extrac. space pl. membrane intracellular s. connexon (hemichannel) connexin pore  Коннексини - це спеціалізовані мембранні білки, які, згруповуючись, утворюють канали між цитоплазмами двох суміжних клітин (коннексон).  У щілинних контактах між кардіоміоцитами шлуночка серця експресується переважно коннексин-43 (Сх43), який забезпечує передачу електричного сигналу по серцю.  При стрептозотоцин-індукованому діабеті спостерігається порушення розподілу і локалізації Сх43, що може корелювати з погіршенням серцевої провідності.  Відомо, що ω-3 поліненасичені жирні кислоти (ПНЖК) покращують функціонування серця за умов різноманітної серцево-судинної патології.  Грунтуючись на даних літератури припускаємо зміни розподілу і локалізації Сх43 в серці за умов експериментального діабету на фоні вживання ω-3 ПНЖК. Жуковська А. С., відділ загальної та молекулярної патофізіології, 2011 2
  • 3. Конференція молодих вчених «Фізіологія: від молекул до організму», 20-21 жовтня 2011 року Мета, матеріали і методи МЕТА: дослідити вплив ω-3 ПНЖК (препарат “Епадол”) на розподіл і локалізацію Сх43, виявленого в структурах серця і аорти при моделюванні експериментального цукрового діабету (ЦД). МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ: Для досліду використано щурів самців, яких розподілено на 3 групи:1 – контрольну, n=7 2 – щурів зі стрептозотоцин-індукованим (50 мг/кг) цукровим діабетом (ЦД), n=7, 3 – щурів, які після підтвердження стрептозотоцин-індукованого ЦД протягом 4 тиж отримували ω-3 ПНЖК, n=7 (препарат «Епадол», 0,1 мл/100 г маси тіла щура) (містить 43% суми ДГК та ЕПК). Жуковська А. С., відділ загальної та молекулярної патофізіології, 2011 3
  • 4. Залежність показників маси тіла і рівню глюкози щурів при експериментальному ЦД і вживанні ω-3 ПНЖК 232,85 250 219,7 ** 200 177,5 150 Масса тела крысы, г 100 Глюкоза, мМ/л 50 33 * 19,2 ** 7,8 0 І группа ІІ группа ІІІ группа Примітка: * - вірогідно у порівнянні з контролем, ** - вірогідно у порівнянні з цукровим діабетом; Р<0,05 Жуковська А. С., відділ загальної та молекулярної патофізіології, 2011 4
  • 5. Діаграма 1. Вміст α-ліноленової та арахідонової кислот в гомогенаті тканини міокарда щурів експериментальних груп α-ліноленова, ω-3 ПНЖК Арахідонова, ω-6 ПНЖК 1,4 45 1,2 40 * 35 1 30 ** 0,8 І група І група 25 ІІ група ІІ група 0,6 20 ІІІ група ІІІ група 15 0,4 10 0,2 5 0 0 Примітка: * - вірогідно у порівнянні з контролем, ** - вірогідно у порівнянні з цукровим діабетом; Р<0,05 Жуковська А. С., відділ загальної та молекулярної патофізіології, 2011 5
  • 6. Імуногістохімія виявлення Сх43 в тканині лівого шлуночка тварин дослідних груп  КМЦ 5 * КМЦ 4 3 2 Сх 43 Сх 43 1 0 І група ІІ група ІІІ група А С Примітка: А - контроль, В – група ЦД, С – прийом ω-3 ПНЖК Сх 43 – коннексин 43, КМЦ – кардіоміоцит; збільшення Х40, Сх 43 * - вірогідно у порівнянні з контролем, ** - вірогідно у порівнянні з цукровим діабетом; КМЦ В Р<0,05 6 Жуковська А. С., відділ загальної та молекулярної патофізіології, 2011
  • 7. Діаграма 3. Зміни експресії Сх43 в тканині лівого шлуночка щурів експериментальних груп, неопубліковані дані Шиш А. М. 2,0 * 1,8 ** 1,6 1,4 1,2 1,0 0,8 0,6 І ІІ ІІІ 0,4 0,2 0,0 1 2 3 І група ІІ група ІІІ група Примітка: * - вірогідно у порівнянні з контролем, ** - вірогідно у порівнянні з цукровим діабетом; Р<0,05 Жуковська А. С., відділ загальної та молекулярної патофізіології, 2011 7
  • 8. Імуногістохімія виявлення Сх43 в тканині аорти тварин Сх 43 дослідних груп А Сх 43 Число імунорективних частинок / 1 мм2 ендотелію 80000 С 70000 Примітка: 60000 50000 А - контроль, В – група ЦД, С – прийом ω-3 ПНЖК 40000 Сх 43 – коннексин 43 30000 20000 10000 0 Число імунорективних частинок / 1мм2 середньої оболонки Площа ІФ реакції / Площа виміряної тканини в аорті (E+СО) 90 000 80 000 Сх 43 5,00000 70 000 4,50000 4,00000 60 000 # 3,50000 50 000 3,00000 K 40 000 2,50000 STZ % # STZ+FO 2,00000 * 30 000 ## 1,50000 20 000 1,00000 8 10 000 B 0,50000 0,00000 0
  • 9. Конференція молодих вчених «Фізіологія: від молекул до організму», 20-21 жовтня 2011 року Висновки  Додавання ω-3 ПНЖК до раціону щурів статистично значимо попереджувало зниження маси тіла і призвело до зниження рівня глюкози крові у тварин з експериментальним ЦД .  Виявлено, що за допомогою ω-3 ПНЖК відбувається модифікація жирнокислотного складу гомогенату тканини міокарда.  За результатами імунофлуоресцентного аналізу при ЦД спостерігається порушення розподілу, дезорганізація і латералізація коннексину-43, зміна числа імунореактивних частинок коннексину-43 у вставних дисках, порівняно з контролем.  Отримання щурами ω-3 ПНЖК сприяло нормалізації розподілу коннексину-43 при експериментальному ЦД, а число імунореактивних частинок коннексину-43 наблизилось до контрольних значень.  Отже, застосування ω-3 ПНЖК покращує структурні зміни коннексину-43 в серці та аорті, викликані ЦД і можуть бути корисними у зниженні ризику серцево-судинних ускладнень за цієї патології. Жуковська А. С., відділ загальної та молекулярної патофізіології, 2011 9
  • 10. Конференція молодих вчених «Фізіологія: від молекул до організму», 20-21 жовтня 2011 року Виражаємо глибоку подяку співробітникам Інституту серця САН, де частково виконувалась робота: •Трібуловій Нарціс •Округліцовій Людмилі •Беновій Тамарі Щиро дякую за допомогу в роботі співробітникам Інституту фізіології НАНУ:  Мойбенко Олексію Олексійовичу  Скібо Галині Григорівні  Шиш Анжелі Михайлівні  Брюзгіній Тетяні Семенівні Жуковська А. С., відділ загальної та молекулярної патофізіології, 2011 10
  • 11. 11

Notas do Editor

  1. Доброго дня, шановн ий головуючий, присутні! Я вдячна організаторам за надану мені можливість виступити на цій конференції. Я представляю Інститут фізіології імені О. О. Богомольця, Відділ загальної та молекулярної патофізіології. Мій н ауковий керівник – Академік НАН України Олексій Олексійович Мойбенко. Тема моєї доповіді: Вплив ω-3 поліненасичених жирних кислот на структурні зміни коннексину-43 при стрептозотоцин-індукованому цукровому діабеті .
  2. За даними ВООЗ цукровий діабет (ЦД) нині – це епідемія неінфекційного походження. Серцево-судинні захворювання є головною причиною смертності при ЦД – 80 % (Тронько М. Д. Аналіз, пріоритети, шляхи виконання державної цільової програми «Цукровий діабет» на 2009-2013 роки // Здоров2я України,номер 18 (247) за сентябрь 2010 года, С. 42-43 ). Схоже, що структурна перебудова міокарду при патології серцево-судинної системи пов`язана з ремоделюванням внутрішньоклітинних щілинних контактів, яке сприяє розвитку ішемічних пошкоджень міокарду [ Ruiz-Meana1 M., Rodrıguez-Sinovas A., Cabestrero A., Boengler K., Heusch G., Garcia-Dorado D. // Cardiovascular Research. – 2008. – 77. – Р.325–333. ] та аритмій . Щілинні контакти складаються з коннексинів.
  3. В рамках спільного українсько-словацького проекту SRDA SK-UA-0022-09 у Інституті серця САН було виконано непряму імунофлуоресценцію на серії поперечних зрізів незафіксованої тканини грудної аорти і шлуночків серця, товщиною 10 мкм . Фіксацію проводили у 4% параформальдегіді тричі по 5 хв. Зрізи інкубували з первинними моноклональними мишачими анти-коннексин 43 антитілами (1:100, Chemicon Int., Inc., USA) 1,5 год (зрізи аорти – протягом ночі) за кімнатної температури, використовували вторинні FITC кон`юговані козячі анти-мишачі антитіла (1:100, Chemicon), інкубували 1,5 год у темряві. Первинні антитіла виступили в якості негативного контролю. Після відмивання у PBS , зрізи фіксували у середовищі для фіксації Vectashield mounting medium (Vector Laboratories, USA) і фотографували через флуоресцентний мікроскоп Axiostar fluorescent microscope (Carl Zeiss, Germany). Фотографії були оцифровані і кількісний аналіз зображень здійснювався за допомогою програмного забезпечення Soft Imaging System,GmBh, Germany. В серці оцінювали 16 (у аорті – 12) випадково обраних ділянок. На кожній обраній ділянці було отримано імунофлуоресцентне забарвлення коннексину 43, і використано для обрахунку площі сигналу коннексину 43, інтенсивність свічення якої була виражена напівкількісним методом.
  4. Нами виявлено, що отримання щурами ω-3 ПНЖК статистично значимо попереджувало зниження маси тіла і призвело до зниження рівня глюкози крові у тварин з ЦД .
  5. Як наведено на Діаграмі 1 розвиток ЦД (ІІ група) призводив до статистично значимого збільшення вмісту арахідонової кислоти та деякого зменшення вмісту α-ліноленової кислоти порівняно з контролем. Застосування препарату ω-3 ПНЖК в ІІІ групі дослідів змінює жирнокислотний склад гомогенату тканини міокарда за умов ЦД. Зокрема в серці поряд зі збільшенням вмісту α-ліноленової кислоти більш, ніж у два рази (на 157,2 %) відбувалось статистично значиме зменшення вмісту арахідонової кислоти. Таким чином, додавання до раціону харчування ω-3 ПНЖК призводить до модифікації жирнокислотного складу клітинних мембран серця, зокрема збільшенню вмісту ω-3 ПНЖК та зменшує вміст арахідонової кислоти, що може покращувати стан ССС. Більшістю дослідників зазначається, що жирні кислоти, які вбудовуються в мембрану внаслідок отримання тваринами ω-3 ПНЖК можуть змінювати низку внутрішньоклітинних та мембранних функцій, таких як потік іонів, транспорт електронів, активність мембранних ферментів, функції рецепторів та внутрішньоклітинних вторинних месенджерів. Так в роботі Holguin et al .(2005) показано, що збагачення раціону α-ліноленовою кислотою покращує автономну функцію серця і має антиаритмічний вплив [17]. Раніше Шиш А. М. та ін. було показано, що зниження вмісту арахідонової кислоти сприяє зменшенню кількості прозапальних цитокінів, тромбозу, набряку, вазоконстрикції коронарних судин, ішемічних та аритмогенних реакцій [2]. Також є відомості, що використання ω-3 ПНЖК може сприяти більш ефективному використанню кисню і утилізації енергії через активацію метаболічного резерву серця [26].
  6. На мікрознімку продемонстровано, що розвиток ЦД супроводжувався порушенням розподілу коннексину 43 в міокарді лівого шлуночка. Так, відмічалося розсіювання, латеральний перерозподіл, поява поодиноких імунореактивних частинок коннексину 43 у вставних дисках та на поверхні мембрани. Тоді як в нормі (контрольний мікрознімок) Сх 43 локалізується у вставних дисках. порушення цілісності КМЦ у тканині ЛШ. Дані підтверджуються статистично значимим підвищенням середньої інтенсивності імунофлуоресцентного сигналу коннексину 43 на 19,975% (20Х) . У тканині лівого шлуночка щурів, які на фоні ЦД отримували ω-3 ПНЖК спостерігали деяке зниження імунофлуоресцентного сигналу коннексину 43 на 6,72% (20Х). Також показана нормалізація просторового розташування, локалізація Сх 43 у вставних дисках, впорядкованість і відновлення цілісності КМЦ у лівому шлуночку щурів ІІІ групи.
  7. За результатами Western blot аналізу під впливом стрептозотоцину експресія коннексину 43 в серці статистично значимо зростає на 68,28%, порівняно з контрольною групою. Експресія коннексину 43 на фоні дієти знижувалась статистично значимо на 20,06% , порівняно з групою ЦД. Таким чином під впливом стрептозотоцину у міокарді тварин відбувається підсилення інтенсивності імунофлуоресцентного сигналу, порушення розподілу і гіперекспресія коннексину 43. Введення до раціону харчування ω-3 ПНЖК викликало нормалізацію імунореактивності та експресії коннексину 43 в міокарді ЛШ щурів з ЦД. Заморожену тканину лівого шлуночка розтирали у ступці до порошкоподібного стану і лізували у розчині SB20 (20% SDS, 10 ммоль/л EDTA, 0.5 ммоль/л ортованадат натрію, 0.1 моль/л TRIS, pH 6.8) за допомогою ультразвуку. Загальну концентрацію білку визначали за методом Bradford. Рівна кількість білку у кожному зразку була розділена за допомогою електрофорезу в поліамідному гелі в присутності 10% додецилсульфату натрію (SDS) і перенесена на мембрану з полівініліденфториду ( PVDF ). З метою блокування неспецифічних зв`язків отримані реплікати блокували 5% розчином сухого знежиреного молока з TRIS блокуючим буфером, TBS (20 ммоль/л Tris, 150 ммоль/л NaCl, pH 7.4-7.6) протягом години. Далі мембрану інкубували з первинними кролячими ? антитілами (анти-коннексин 43 C 6219, Sigma-Aldrich у розведенні ? 1:2000) проягом ночі при 4°C з наступною інкубацією протягом години з вторинними ? антитілами (мічений пероксидазою хріна ? анти-кролячий імуноглобулін, Amersham Biosciences, 1:2000). Зв`язані антитіла визначали за методом хемілюмінесцентної детекції ECL , оптичну щільність зв`язків аналізували за допомогою програмного забезпечення PCBAS 2.08e, використовуючи GADPH (анти- GADPH антитіла) в якості внутрішнього контролю.
  8. За результатами імуногістохімічного дослідження в групі ЦД визначено зменшення числа Сх 43-позитивних частинок всередині м ` язових частин та ендотелію аорти і не впорядкованість структурних елементів аорти в порівнянні з контрольною групою. Дані підтверджені результатами статистичного аналізу, що відображають зниження числа імунореактивних частинок в 1 мм2 ендотелію і середньої оболонки, зниження співвідношення площі ІФ реакції/площі виміряної тканини аорти при ЦД. Додавання до раціону ω-3 ПНЖК нормалізувало розподіл коннексину 43, сприяло більш впорядкованому розміщенню структур аорти, порівняно з групою ЦД. Представлені результати статистичного аналізу свідчать про нормалізацію числа імунореактивних частинок в 1 мм2 ендотелію і середньої оболонки, співвідношення площі ІФ реакції/площі виміряної тканини аорти у щурів ІІІ групи. Отже, нами показано, що стрептозотоцин-індукований ЦД змінював розподіл коннексину 43 і знижував інтенсивність імунофлуоресцентного сигналу в тканині аорти щурів, а отримання ω-3 ПНЖК викликало відновлення розподілу та імунореактивності коннексину 43 в аорті щурів з ЦД.